摘要
将18只C57BL/6J雄性小鼠适应性喂养1 w后，按体质量随机分为普通组（n=6）、高脂组（n=12），分别给予普通饲料和高脂饲料喂养，造模4 w后，进行痰证模型评价，检测血清中血脂指标HDL-C、LDL-C、TC、TG水平；造模成功后，将高脂组按体质量进一步随机分为模型组（n=6）和二陈汤组（n=6），二陈汤组给予二陈汤灌胃11.1 g/（kg·d），普通组和模型组均给予等体积生理盐水，持续3 w后处死，同样测定上述指标；HE染色观察肝脏病理改变；qPCR检测肝脏中脂肪酸摄取及β氧化相关基因CD36、ACSL1、CPT1A、LCAD的mRNA表达水平。
（1）高脂饲料喂养4 w后，高脂组体质量显著增加（P<0.05），TC、LDL-C显著增加（P<0.01）。（2）二陈汤干预3 w后，与普通组相比，模型组体质量、腹围显著增加（P<0.01），LDL-C、TC、TG显著增加（P<0.05，P<0.05，P<0.001），病理切片示肝细胞空泡性改变，肝脏脂质沉积明显，呈现肝脂肪变性，肝组织中CD36、ACSL1、CPT1A mRNA水平升高（P<0.001），LCAD的mRNA水平降低（P<0.001）；与模型组相比，二陈汤组体质量显著降低（P<0.05），TC、TG显著下降（P<0.05，P<0.01），肝脏脂肪变性显著改善，空泡减少，肝组织中CD36、ACSL1、CPT1A mRNA水平下降（P<0.001），LCAD的mRNA水平升高（P<0.001）。
近几十年来，中国民众血脂水平及高血脂症患病率逐年递
18只SPF级C57BL/6J品系雄性小鼠，体质量（20±2） g，购买自上海斯莱克研究动物有限责任公司，饲养于福建中医药大学实验动物中心SPF级屏障系统中，动物实验设施许可证编号为SYXK（闽）2019-0007。本实验已通过实验动物伦理审查，伦理批号为2023162。
普通饲料由福建中医药大学动物实验中心提供。高脂饲料为Research DietsInc品牌（货号D12451），购买于广州博奥派克生物科技有限公司（具体成分：蛋白质20 kcal%、糖类35 kcal%、脂肪45 kcal%）。二陈汤选自《太平惠民和剂局方》，药物组成为：陈皮15 g，姜半夏15 g，茯苓9 g，炙甘草4.5 g，生姜7片（约9 g），乌梅1枚（约3 g）。上述药物1剂，购买于福建中医药大学学校平台，煎煮并浓缩至100 mL，药物浓度为0.555 g/mL。
将18只C57BL/6J雄性小鼠适应性喂养1 w后，按体质量随机分为普通组（n=6）、高脂组（n=12），分别给予普通饲料和高脂饲料喂养，每3 d记录1次小鼠体质量、腹围，观察小鼠情况。造模4 w后，对小鼠进行眼眶采血，检测血清HDL、LDL、TC、TG水平，若高脂组血脂水平高于普通组则痰证模型建立成
二陈汤干预3 w后，将小鼠禁食12 h，摘眼球采血，分离血清，按照TC、TG、HDL、LDL试剂盒说明书加样，于多功能酶标仪检测吸光值(OD)，根据说明书推荐公式进行计算：HDL及LDL（mmol/L）=(样本A2-A1)-(空白A2-A1)/(标准品A2-A1)-(空白A2-A1)×标准品浓度；TC及TG（mmol/L）=(样本A-空白A)/(标准品A-空白A)×标准品浓度。
将肝脏浸泡于4%多聚甲醛中固定24 h，冲水6 h后，经过80%、85%、90%、95%、100%酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡（硬蜡、软蜡）、石蜡包埋、切片、脱蜡（二甲苯及100%、95%、90%、85%、80%酒精）、苏木精及伊红染色、脱水、中性树脂封片，于光学显微镜下观察各组肝脏病理形态。
取≤10 mg的肝脏组织，按照RNA提取试剂盒说明书提取RNA，检测RNA浓度后，调整RNA浓度，将RNA逆转录为cDNA，根据试剂说明书进行qPCR实验。本研究采用
| 基因 | 上游引物 | 下游引物 |
|---|---|---|
| ACSL1 | CCATCTTCCCTGTGGTTCCC | GAAGCTCCGCCTCTTTCCTT |
| CPT1A | AGCGACTCTTCAATACTTCCCG | GCCTCTGTGGTACACGACAATG |
| LCAD | GTTGCACACATACAGACGGTG | CCGTGGAGTTGCACACATTC |
| β-actin | CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC | ATGGAGCCACCGATCCACA |
| CD36 | GCGACATGATTAATGGCACAGA | TCCGAACACAGCGTAGATAGAC |
高脂饲料喂养4 w后，与普通组对比，高脂组小鼠出现体型肥胖、毛发油腻，嗜睡倦怠懒动，但尚未见精神萎糜、体毛光亮度减退等证候表现，其体质量显著增加（P<0.05），见
| 组别 | n | 体质量（g） | 腹围（cm） |
|---|---|---|---|
| 普通组 | 6 | 24.583±1.854 | 7.367±0.216 |
| 高脂组 | 12 |
26.908±2.32 | 7.542±0.419 |
注： 与普通组相比
| 组别 | n | 体质量（g） | 腹围（cm） |
|---|---|---|---|
| 普通组 | 6 | 25.933±1.795 | 7.700±0.126 |
| 模型组 | 6 |
30.217±1.73 |
8.100±0.16 |
| 二陈汤组 | 6 |
27.683±2.58 | 7.917±0.279 |
注： 与普通组相比
高脂饲料喂养4 w后，如
| 组别 | n | TC | TG | HDL-C | LDL-C |
|---|---|---|---|---|---|
| 普通组 | 6 | 1.569±0.271 | 0.599±0.070 | 1.438±0.344 | 0.428±0.102 |
| 高脂组 | 12 |
2.071±0.26 | 1.123±0.404 | 2.097±0.565 |
0.824±0.13 |
注： 与普通组相比
| 组别 | n | TC | TG | HDL-C | LDL-C |
|---|---|---|---|---|---|
| 普通组 | 6 | 3.703±0.889 | 1.143±0.284 | 2.434±0.736 | 2.947±0.521 |
| 模型组 | 6 |
5.237±1.01 |
1.843±0.27 | 3.429±1.307 |
4.631±1.26 |
| 二陈组 | 6 |
3.987±1.11 |
1.284±0.30 | 2.393±0.713 | 4.975±0.521 |
注： 与普通组相比
普通组中央静脉周围的肝板排列整齐，肝细胞未见异常；与普通组相比，模型组肝细胞弥漫脂肪变性，肝细胞以空泡性改变为主；与模型组相比，二陈汤组肝细胞空泡性改变显著减少。见
图1 各组小鼠肝脏病理切片图（200倍）
普通组 模型组 二陈汤组
药物干预3 w后，与普通组对比，模型组小鼠CD36、ACSL1 mRNA表达显著升高（P<0.001），表明模型组小鼠脂肪酸摄入增多，脂质合成增多；而CPT1A mRNA升高（P<0.001），LCAD mRNA降低（P<0.001），表明脂肪酸β氧化紊乱，β氧化能力下降，增加肝细胞中脂质沉积，引起肝脂肪变性。与模型组对比，二陈汤组CD36、ACSL1 mRNA表达显著下降（P<0.001），CPT1A mRNA降低至普通组水平，LCAD mRNA升高（P<0.001），表明二陈汤摄入可使脂质合成减少，脂肪酸β氧化紊乱状态得到改善。见
图2 肝脏组织中ACSL1、CPT1A、LCAD mRNA的相对表达量
CON：普通组；HFD：模型组；EC：二陈汤组；两组间比较
《黄帝内经素问集注》云：“中焦之气，蒸津液化，其精微溢于外则皮肉膏肥，余于内则膏肓丰满。”中医认为中焦脾胃将五谷转化为精微，由脾将精微物质输布渗灌于皮肤肌腠、充养于脑髓
本研究采用高脂饲料喂养小鼠建立高血脂症痰证模型。喂养高脂饲料4 w后，高脂组小鼠体质量、血清LDL-C、TG显著增加（P<0.05），表明模型建立成
高脂饮食引起肝细胞摄取的FFA增多，脂质合成增多及FAO减弱是导致肝脏脂肪代谢异常的重要环
本研究结果显示，与普通组比较，模型组小鼠肝脏中CD36、ACSL1、CPT1A的mRNA表达水平升高，LCAD mRNA表达显著降低，表明模型组小鼠肝细胞摄取FFA增多，肝细胞TG合成增多，线粒体脂肪酸β氧化功能异常，造成肝细胞内脂质代谢紊乱；与模型组比较，二陈汤组CD36、ACSL1、CPT1A 的mRNA表达水平降低，LCAD mRNA表达增加，表明二陈汤能够减少肝细胞摄入FAA及肝脏TG合成，改善脂肪酸β氧化能力，将肝细胞内脂质代谢功能恢复至正常水平，肝脏病理结果验证了此结论。薛欣等
本次实验的不足之处在于，本次实验仅使用二陈汤的中剂量作为药物组，治疗剂量较小，且尚未对二陈汤的剂型进行探索，药物剂型仅为汤剂，可能在煎煮及保存等过程中存在不稳定因素，这些都可能影响小鼠灌胃二陈汤后在体内发挥疗效。因此，后期可进行二陈汤高、中、低剂量的颗粒剂或汤剂对高血脂症痰证模型小鼠的脂质代谢相关机制进行探讨。
综上所述，二陈汤可能通过健脾化痰作用，减少肝细胞外源性脂质摄取及恢复肝脂质代谢功能，改善高血脂症痰证小鼠的肝脏脂肪变性。
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