摘要
收集联勤保障部队第900医院2016年3月—2017年1月病理确诊为乳腺癌的患者共86例，并整理其临床病理资料。采用量聚合酶链反应检测乳腺癌患者的NKILA。入组的86例乳腺癌患者，既往已完成《中医体质分类与判定表》问卷调查表，原始资料完整。将NKILA表达与患者体质分型及临床病理特征进行统计分析。
（1）86例乳腺癌患者的中医体质类型主要表现为气郁型、血瘀型、痰湿型和湿热型四类。（2）86例乳腺癌患者的NKILA表达的高低受部分临床指标如肿瘤大小、肿瘤分期、组织学分级、淋巴结转移个数和人表皮生长因子受体（Her-2）的影响，差异有统计学意义（P0.05）；乳腺癌患者的中医体质类型及年龄、绝经状态、雌激素受体（ER）等指标对NKILA表达无显著影响（P0.05）。
近年来，乳腺癌成为女性最常见的恶性肿瘤之一。据统计，乳腺癌发病人数占女性恶性肿瘤发病人数的8%～10
中医体质决定疾病的发生发展，为疾病诊疗和预防提供理论性指导，更是中医“治未病”思想的具体化体
为此，笔者通过研究和探讨乳腺癌患者的临床病理特征、中医体质类型是否对NKILA表达存在影响，旨在为乳腺癌的预防和治疗提供中医角度的思路和方法。
筛选联勤保障部队第900医院2016年3月—2017年1月确诊为乳腺癌并进行乳腺切除术的患者共86例，并将其病理指标进行研究。入组的86例患者年龄分布在24~84岁，平均年龄为51岁，其中气郁型28例，血瘀型23例，痰湿型12例，湿热型9例，阴虚型7例，阳虚型5例，气虚型2例。
乳腺癌的诊断标准参照《乳腺癌诊疗规范（2011年版）
①符合乳腺癌的诊断标准，在行乳腺癌手术前按照《中医体质分类及判定表》进行问卷调查；②患者原始资料完整可随访；③术前未接受过系统性的可能影响术后分子分型及患者体质的任何抗肿瘤治疗；④能够配合本次研究，并完成部分调查；⑤取得患者及家属同意并签署知情同意书。
①因自身原因或其他客观因素无法配合本次研究，如妊娠或哺乳期妇女、精神障碍患者；②其他原因不适合入组，如合并有其他肿瘤的患者，病情严重无法参与配合的患者等；③兼夹体质的体质类型较复杂，故不在本次研究范围内。
参照中华中医药学会制定的《中医体质分类与判定表》制定调查问卷，对86例乳腺癌患者进行问卷调查，根据调查问卷结果判定患者的中医体质类型。对患者的年龄、绝经状态、肿瘤大小、组织学分级、淋巴转移个数、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体2（HER-2）、细胞增殖核抗原（Ki-67）等指标进行统计分析。
采用量聚合酶链反应检测患者乳腺癌组织中的NKILA，具体操作步骤如下。①利用RNAt提取试剂盒（购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司，简称Vazyme）从新鲜的乳腺肿瘤组织中提取RNA。②利用分光光度仪（型号为美国ThermoNanoDrop）测量RNA的浓度和纯度，用测得的浓度计算后续反应。③聚合酶链反应(qpcr)：准备PCR管（购自美国Kirgen）；设置PCR反应体系扩增程序[预变性94℃(5 min)；变性94℃(30 s)；退火60℃ (30 s)；延伸72℃(20 s)；2→4(30个循环)；延伸72℃ (7 min)]；反应完成后取扩增产物在0.9%琼脂糖凝胶电泳(购自碧云天生物技术研究所)进行检测。
NKILA的判定标准如下：计算NKILA的相对表达量即RQ值（相对定量值）用于实时荧光定量PCR（qPCR）中，通过比较目的基因与内参基因的表达量来评估基因表达差异。RQ值=2^(-△△Ct)，公式中的各个部分含义如下：△Ct=Ct目的基因-Ct内参基因（Ct值：qPCR 中荧光信号达到设定阈值时的循环数，反映模板的初始量；△Ct：目的基因与内参基因的 Ct值差，用于消除样本间的操作差异）；△△Ct=△Ct检测指标-△Ct参考指标（△△Ct：检测样本与参考样本的△Ct差值，用于比较不同样本间的基因表达差异）。界定NKILA的表达量：根据乳腺癌组织中NKILA的RQ 值由高到低进行排序后分为2组，分别按前25%为高表达，后面75%为低表达。利用卡方检验最终将NKILA的RQ值0.906定义为高表达，RQ值≤0.906定义为低表达。
对86例乳腺癌患者完成的中医体质分类与判定表调查问卷结果进行统计分析：气郁型占比最高，为32.56%（28例）；其次是血瘀型，占比26.75%（23例）；痰湿型占比13.95%（12例）；湿热型占比10.46%（9例）；阴虚型占比8.14%（7例）；阳虚型占比5.81%（5例）；气虚型占比最低，为2.33%（2例）。见
| 中医体质类型 | 气郁型 | 血瘀型 | 痰湿型 | 湿热型 | 阴虚型 | 阳虚型 | 气虚型 | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
|
数量（例） 占比（%） |
28 32.56 |
23 26.75 |
12 13.95 |
9 10.46 |
7 8.14 |
5 5.81 |
2 2.33 |
肿瘤细胞中NKILA的表达水平与乳腺癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移情况、组织学分级、肿瘤分期和Her-2状态密切相关。具体而言，肿瘤较大、淋巴结转移个数多、组织学分级高、肿瘤分期晚、Her-2阳性的乳腺癌患者中NKILA的表达水平较低；而肿瘤较小、淋巴结转移个数少、组织学分级低、肿瘤分期较早、Her-2阴性的患者中NKILA的表达水平较高，这一差异具有统计学意义（P0.05）。而乳腺癌患者的年龄、绝经状态、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、细胞增殖核抗原（Ki-67）等指标则对NKILA的高低表达未有明显影响，差异无统计学意义 (P0.05)。见
| 项 目 | 分类 | 例数 | NKILA低表达 （例·%） | NKILA高表达 （例·%） | P值 |
|---|---|---|---|---|---|
| 年龄 |
≤35 35 |
7 79 |
4(4.65） 39(45.35） |
3(3.49） 40(46.51） | 1.000 |
| 绝经状态 |
绝经前 绝经后 |
65 21 |
32(37.21） 11(12.79） |
33(38.37） 10(11.62） | 0.802 |
| 肿瘤大小 |
≤2 cm 2 cm |
29 57 |
5(5.81） 38(44.19） |
24(27.91） 19(22.09） | 0.001 |
| 组织学分级 |
1级 2级 3级 |
7 58 21 |
1(1.16） 26(30.23） 16(18.60） |
6(6.98） 32(37.21） 5(5.81） | 0.006 |
| 肿瘤分期 |
I期 Ⅱ期 Ⅲ期 |
15 50 21 |
0(0.00） 26(30.23） 17(19.77） |
15(17.44） 24(27.91） 4(4.65） | 0.001 |
| 淋巴结转移个数 | 0个 | 40 | 12(13.95） | 28(32.56） | 0.002 |
|
ER（雌激素受体） |
1~3个 4个 (-) |
26 20 21 |
16(18.60） 15(17.44） 14(16.27） |
10(11.62） 5(5.81） 7(8.14） |
0.079 |
|
PR（孕激素受体） |
(+) (-) (+) |
65 25 61 |
29(33.72） 16(18.60） 27(31.40） |
36(41.86） 9(10.47） 34(39.53） | 0.096 |
| Her-2（人表皮生长因子受体） | (-) | 64 | 27(31.40） | 37(43.02） | 0.013 |
|
Ki-67（细胞增殖核抗原） |
(+) ≤14% 14% |
22 19 67 |
16(18.60） 6(6.98） 37(43.02） |
6(6.98） 13(15.11） 30(34.88） | 0.069 |
乳腺癌患者的中医体质分型并未能影响患者肿瘤细胞中NKILA的表达的高低，差异无统计学意义(P0.05)。见
| 中医体质类型 | 例数 | NKILA低表达 （例·%） | NKILA高表达 （例·%） | P值 |
|---|---|---|---|---|
|
总例数 气郁型 | 86 | 43(50.00) | 43(50.00) | |
| 是 | 28 | 12(13.95) | 16(18.60) | 0.357 |
|
否 血瘀型 | 58 | 31(36.04) | 27(31.40) | |
| 是 | 23 | 13(15.12) | 10(11.62) | 0.465 |
|
否 痰湿型 | 63 | 30(34.88) | 33(38.37) | |
| 是 | 12 | 8(9.30) | 4(4.65) | 0.351 |
|
否 湿热型 | 74 | 35(40.70) | 39(45.34) | |
| 是 | 9 | 6(6.98) | 3(3.49) | 0.481 |
|
否 其他型 | 77 | 37(43.02) | 40(46.51) | |
| 是 | 14 | 4(4.65) | 10(11.62) | 0.144 |
| 否 | 72 | 39(45.35) | 33(38.37) |
中医体质学说将人体体质划分为九种基本类型，其中平和质表征生理功能协调状态，其余八种偏颇体质（阳虚质、阴虚质、气虚质、痰湿质、湿热质、血瘀质、特禀质及气郁质）则反映机体阴阳失衡的亚健康状态。本研究纳入86例乳腺癌患者，体质分布以气郁质（32.56%）、血瘀质（26.75%）、痰湿质（13.95%）及湿热质（10.46%）为主，与张莉
本研究发现，乳腺癌组织中NKILA的表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移数目、组织学分级及肿瘤分期呈现显著相关，与Her-2过表达状态亦存在统计学关联。上述指标共同提示NKILA低表达可能反映肿瘤侵袭性增强，其机制可能与NKILA通过抑制IκB磷酸化阻断NF-κB信号通路活化，进而促进上皮-间质转化（EMT）相关。在86例患者中，年龄、绝经状态、ER、PR、Ki-67等与NKILA表达无显著相关性。此现象可能归因于特定分子亚型的异质性，如Luminal型乳腺癌中激素受体信号通路占主导地位，而NKILA主要通过与NF-κB/IκB复合物结合调控炎症相关通路。尽管临床病理参数（如肿瘤大小、淋巴结转移）可用于初步危险分层，但其对复发转移风险的预测效能存在瓶颈。本研究提示需整合分子标志物（如NKILA）构建多维度预后模型，以弥补传统指标的不足。而本研究阴性结果与Nagan
在本次研究过程中，乳腺癌患者肿瘤组织中NKILA的表达水平与中医体质分型（血瘀质、气郁质、痰湿质等）未呈现统计学关联。这一观察结果提示需关注以下研究的局限性。①样本量限制：当前样本量（n=86）导致统计效力不足，可能掩盖潜在关联性。②方法学异质性：NKILA检出率受检测技术制约。③体质动态演变：手术及辅助治疗可能改变患者体质特征，需建立纵向队列追踪体质-基因表达动态关联。尽管未发现体质与NKILA直接关联，但骆斌
本研究揭示了86例乳腺癌患者的中医体质主要集中于血瘀型、气郁型、痰湿型和湿热型四型，为乳腺癌术后的中医药治疗提供了有益的理论参考。乳腺癌组织中NKILA的低表达主要见于肿瘤大、淋巴结转移个数多、组织学分级高、肿瘤分期晚、人表皮生长因子受体（Her-2）阳性的患者；NKILA低表达可能提示乳腺癌患者预后不良，肿瘤侵袭性强，并可能成为治疗干预的潜在目标；而NKILA高表达则可能提示预后较好。乳腺癌患者NKILA表达的高低均未受中医体质类型的影响，但因样本量较小，使结果没有显著的代表性，无法为临床提供指导性意见，需要进一步扩大样本量进行研究。
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