摘要
将48只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、秋水仙碱组（给药剂量为1.0×1
与模型组比较，秋水仙碱组与三仁汤低、中、高剂量组肝脏炎症浸润呈现不同程度减少，肝细胞结构形态相对正常，肝细胞变性坏死减轻，肝纤维结缔组织减少，胶原纤维组织缩小。与模型组比较，三仁汤中、低剂量组及秋水仙碱组大鼠的肝重显著升高（P<0.001或P<0.01）；秋水仙碱组及三仁汤中、低剂量组大鼠的肝体比显著升高（P<0.001或P<0.01或P<0.05）；秋水仙碱组以及三仁汤低、中剂量组的IL-1β水平明显降低（P<0.05）；秋水仙碱组以及三仁汤低、中、高剂量组的IL-6水平显著降低（P<0.05）；三仁汤高剂量组的IL-10水平显著升高（P<0.05）；三仁汤低剂量组的TNF-α水平显著降低（P<0.01）；秋水仙碱组以及三仁汤低、中、高剂量组的PDGF-BB水平亦显著降低（P<0.001或P<0.01）。
肝纤维化的主要致病因素有病毒性肝炎（如慢性乙型肝炎和慢性丙型肝炎）、非酒精性脂肪性肝病、饮酒、自身免疫性肝炎等。在各种病因的持续刺激下，肝细胞中以Ⅰ型胶原纤维为主导的细胞外基质在肝实质中过度沉积，导致肝纤维
肝纤维化的发生、发展是一个复杂的病理过程，其中的关键环节是肝星状细胞（HSC）的激
为进一步研究中药的作用机制，笔者以化学性损伤（腹腔注射0.5%二甲基亚硝胺溶液1.6 mL/kg，每周连续2 d，共持续4 w）建立肝纤维化大鼠模型，并以具有明显抑制肝纤维化作用的药物秋水仙
由上海斯莱克动物有限责任公司提供，为无特定病原体的SPF级Wistar大鼠，6 w龄，雄性，体质量（200±20） g，共48只，许可证号为SCXK（泸）2018-0006。实验开始前已通过福建中医药大学伦理委员会审核，批准文号：FJTCM IACUC 2021010。所有大鼠饲养于福建中医药大学实验动物研究中心，许可证号为SYXK（闽）2019-0007。
三仁汤药物组成：杏仁15 g，白蔻仁6 g，薏苡仁18 g，法半夏15 g，滑石18 g，通草6 g，淡竹叶6 g，厚朴6 g。按现代药理学方法，用8倍中药质量的蒸馏水浸泡中药30 min，武火煮沸后文火再煎约40 min，连续2次后去滓合并。根据人与大鼠的剂量换算公式（大鼠以每只200 g体质量计算），水浴加热蒸发浓缩为4.1 g·k
苏木素-伊红（HE）染色试剂盒（厂家：珠海贝索BASO；批号：BA4025）；MASSON染色试剂盒（厂家：珠海贝索BASO；批号：BA4079）；IL-1β ELISA 试剂盒（货号：EK0393；批号：11517741011）；PDGF-BB ELISA试剂盒（货号：EK1698；批号：123817921011）；IL-10 ELISA试剂盒（货号：EK0418；批号：13817591011）；TNF-α ELISA试剂盒（货号：EK0526；批号：24017791011）；IL-6 ELISA试剂盒（货号：EK0412；批号：1331790101）。ELISA试剂盒生产厂家均为武汉博士德生物工程有限公司。
适应性喂养1 w，确定无明显异常后将大鼠随机分为空白对照组、模型组、秋水仙碱组（给药剂量为1.0×1
根据文
干预4 w后，大鼠禁食不禁水12 h，第2 d将大鼠称重。用超纯水配置20%乌拉坦，以0.06 mL·k
与正常组比较，模型组大鼠肝重、体质量、肝体比均明显降低，具有统计学差异（P<0.001）。与模型组比较，三仁汤中、低剂量组及秋水仙碱组大鼠的肝重显著升高（P<0.001或P<0.01）；秋水仙碱组及三仁汤低、中、高剂量组大鼠的体质量与模型组比较，无统计学差异（P>0.05）；秋水仙碱组及三仁汤中、低剂量组大鼠的肝体比与模型组比较，具有统计学差异（P<0.001或P<0.01或P<0.05）。秋水仙碱组及三仁汤中、高剂量组大鼠的肝体比与正常组相当，无统计学差异（P>0.05）。见
| 组别 | 肝重（g） | 体质量（g） | 肝体比（%） |
|---|---|---|---|
| 正常组 |
7.941±0.14 |
314.813±7.95 |
0.025±0.00 |
| 模型组 |
3.479±0.10 |
213.660±1.70 |
0.016±0.00 |
| 秋水仙碱组 |
5.351±0.38 |
214.833±5.80 |
0.025±0.00 |
| 三仁汤低剂量组 |
4.644±0.30 |
221.586±4.22 |
0.021±0.00 |
| 三仁汤中剂量组 |
5.171±0.27 |
225.660±3.87 |
0.023±0.00 |
| 三仁汤高剂量组 |
4.249±0.41 |
210.400±6.73 | 0.020±0.002 |
注： 与正常组比较
正常组大鼠肝细胞以中央静脉为中心，呈放射状排列，结构形态正常，无肝细胞坏死、纤维增生以及炎性浸润；模型组大鼠肝细胞索结构紊乱，肝窦界限模糊，大量炎症细胞浸润，肝细胞结构被破坏，并形成大量纤维结缔组织；秋水仙碱组及三仁汤低、中、高剂量组大鼠肝脏炎症浸润较模型组呈现不同程度减少，肝细胞结构形态相对正常，肝细胞变性坏死减轻，肝纤维结缔组织减少。见
图1 各组大鼠肝脏HE染色（×200）
A：正常组；B：模型组；C：秋水仙碱组；D：三仁汤低剂量组；E：三仁汤中剂量组；F：三仁汤高剂量组
正常组肝脏形态结构正常，未见有明显纤维组织增生及肝小叶形成；模型组可见大量增生性胶原纤维，肝小叶结构被严重破坏，假小叶形成；秋水仙碱组与三仁汤低、中、高剂量组中，可见纤维性增生较模型组有所减少，纤维间隔较模型组缩小，而疗效可见秋水仙碱组>三仁汤低剂量组>三仁汤中剂量组>三仁汤高剂量组。见
图2 大鼠肝组织Masson染色（×100）
A：正常组；B：模型组；C：秋水仙碱组；D：三仁汤低剂量组；E：三仁汤中剂量组；F：三仁汤高剂量组
与正常组比较，模型组IL-1β水平显著升高，具有统计学差异（P<0.05）。与模型组比较，秋水仙碱组及三仁汤低、中剂量组的IL-1β水平明显降低，具有统计学差异（P<0.05）。与正常组比较，模型组IL-6水平显著升高，具有统计学差异（P<0.05）。与模型组比较，秋水仙碱组及三仁汤低、中、高剂量组的IL-6水平显著降低，差异均具有统计学意义（P<0.05）。与正常组比较，模型组IL-10水平显著降低，具有统计学差异（P<0.05）；与模型组比较，三仁汤高剂量组的IL-10水平显著升高（P<0.05）。见
| 组别 | 剂量（g·k | IL-1β | IL-6 | IL-10 |
|---|---|---|---|---|
| 正常组 | - |
105.03±12.5 |
291.04±46.7 |
109.47±31.6 |
| 模型组 | - |
287.79±50.7 |
2611.23±680.3 |
68.70±4.8 |
| 秋水仙碱组 |
1.0×1 |
89.38±17.7 |
431.48±71.6 | 91.00±5.84 |
| 三仁汤低剂量组 | 4.1 |
73.92±18.3 |
321.86±47.7 | 93.53±7.69 |
| 三仁汤中剂量组 | 8.2 |
133.25±50.8 |
510.87±144.8 | 86.53± 6.35 |
| 三仁汤高剂量组 | 16.4 | 170.57±43.01 |
461.74±83.8 |
91.18±9.3 |
注： 与正常组比较
与正常组比较，模型组的TNF-α、PDGF-BB水平显著升高，具有统计学差异（P<0.001或P<0.05）。与模型组比较，三仁汤低剂量组的TNF-α水平显著降低，秋水仙碱组以及三仁汤低、中、高剂量组的 PDGF-BB 水平亦显著降低，差异均有统计学意义（P<0.001或P<0.01）。三仁汤低剂量组的TNF-α水平以及三仁汤低、中、高剂量组的PDGF-BB水平均与正常组相当，差异无统计学意义（P>0.05）。见
| 组别 | 剂量（g·k | TNF-α | PDGF-BB |
|---|---|---|---|
| 正常组 | - |
20.08±1.9 |
4814.32±479.3 |
| 模型组 | - |
29.20±0.9 |
6208.82±382.2 |
| 秋水仙碱组 |
1.0×1 |
28.03±1.0 |
3303.95±361.7 |
| 三仁汤低剂量组 | 4.1 |
21.47±0.5 |
4446.40±423.3 |
| 三仁汤中剂量组 | 8.2 |
25.64±1.6 |
4583.72±270.0 |
| 三仁汤高剂量组 | 16.4 |
31.85±2.2 |
4097.38±359.2 |
注： 与正常组比较
肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是肝病的一种常见的病理过程，是肝组织在受损后修复及愈合的过程中产生的，其表现为细胞外基质（ECM）的异常沉
血小板衍生生长因子（PDGF）由血小板、巨噬细胞、肌成纤维细胞和HSC产生，是促进肝星状细胞活化最强有丝分裂的一种生长因子。在其几种亚型中，PDGF-BB与HSC活化关系最为密切。相关研究表明，慢性乙型病毒性肝炎患者血清中PDGF-BB水平与疾病严重程度成正相
肝脏的慢性炎症反应可导致异常的伤口愈合反应，形成纤维瘢痕，破坏肝脏结构。肝纤维化在一些阶段是一个可逆的过程，去除纤维化反应因子有助于纤维化的消
肝纤维化是现代医学病理形态学概念，中医将其归属于“癥积”“胁痛”“瘀血”“鼓胀”等疾病范
本实验提示三仁汤可能主要通过下调IL-1β、IL-6、TNF-α、PDGF-BB，上调IL-10，有效改善肝脏的炎症反应，缓解肝损伤。观察大鼠肝重、肝体比后可见，三仁汤低、中、高剂量组及秋水仙碱组均较模型组得到不同程度的改善。并且根据以上实验观察，总体来说三仁汤低、中、高剂量组对于肝纤维化大鼠的病理形态及炎症水平均有一定的改善效果。考虑此次实验只进行了组织病理形态观察及ELISA定量分析，而中药成分复杂，可多靶点起调控作用，后续可在mRNA及蛋白定性分析层面进一步观察三仁汤不同浓度之间对相应炎症指标水平影响的区别。
综上所述，三仁汤低、中、高剂量及秋水仙碱均可以减少成纤维细胞增殖，减少胶原纤维沉积，其可能主要通过降低IL-1β、IL-6、TNF-α、PDGF-BB表达水平，并上调IL-10表达水平，从而减少炎症反应，改善肝纤维化程度，在一定程度上可以延缓肝纤维化的进一步发展，但具体作用机制仍需要进一步全面系统的探析。
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