摘要
将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成空白组、模型组、电针组、隔药灸组。空白组予生理盐水灌肠，其余三组均予TNBS-50%乙醇液灌肠，建立UC模型。造模成功后，电针组及隔药灸组均选取天枢穴（双侧）、气海穴，分别进行电针及隔药灸治疗，每日1次，空白组、模型组不干预。干预14 d后，进行大鼠疾病活动性指数（DAI）评分及结肠黏膜损伤指数（CMDI）评分，并检测血清转化生长因子-β（TGF-β）、信号转导分子7（Smad7）、白介素-10（IL-10）及结肠组织TGF-β mRNA、Smad7 mRNA、IL-10 mRNA表达量。
空白组大鼠DAI、CMDI评分显著低于其他三组（P<0.05），电针组、隔药灸组大鼠DAI、CMDI评分均明显低于模型组（P<0.05）；空白组大鼠结肠组织TGF-β mRNA、Smad7 mRNA、IL-10 mRNA及血清TGF-β、Smad7、IL-10表达量明显低于其他三组（P<0.05），电针组、隔药灸组低于模型组（P<0.05）。
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)为非特异炎性肠病，以腹泻、便次增多、黏液脓血便等为主要症状。至目前为止，其病因和发病机理尚未完全阐
斯莱克景达公司（湖南省长沙市）提供的40只SPF级SD雄性大鼠（体重：180～200 g），质量合格证号为43004700032111，许可证号为SCXK（湘）2014-0002。动物饲养于该公司SPF级实验室，温度为20～26 ℃，相对湿度为40%～70%，适应性饲养1 w后，按随机分组法，将其分成空白组、模型组、电针组、隔药灸组各10只。
TNBS（SLBG2766W）；乙醇（国药集团，批号：20181017）；水合氯醛（国药集团，批号：20200917）；石蜡切片机（KW2148，浙江温州）；显微镜（奥林巴斯BF52）；实时荧光定量PCR仪（艾华德replex3）；PCR扩增仪（Bio-RadT110 thermal cycler）；化学发光凝胶成像（Bio-Rad）；台式高速冷冻离心机（HERNLEZ33HK）；核酸水平电泳仪（武汉百达生物BG-SUHWIDI）；核酸蛋白浓度测定仪(BioDropBD1106)；Elisa试剂盒（重庆基因美生物，批号：E-EL-R0016c、E-AB-16094、E-AB-12904）。
禁食、不禁水2 d，空白组予0.6 mL生理盐水灌肠；其余三组于腹腔用10%的水合氯醛350 mg/kg进行注射麻醉，用灌胃针取0.6 mLTNBS-50%乙醇造模剂注入肛门8 cm。灌肠后提尾倒置30 s，然后归笼，取头低脚高位。模型制备后第2 d，每组随机选取3只大鼠，观察耸毛、拱背、进食和活动等情况，并处死大鼠取结肠组织，观察结肠病理变化来判定UC模型是否成
空白组、模型组：无干预。
电针组：造模成功后，将大鼠固定在特制的鼠架上，暴露腹部，根据《实验针灸学
图1 大鼠气海、天枢（双侧）解剖示意图
隔药灸组：造模成功后，将肉桂5 g、附子5 g研末，用黄酒混合调制，并用模具做成厚度约0.2 cm、直径约1 cm的药饼，中间用针刺小孔，将药饼置于大鼠的气海穴、天枢穴（双侧），并选择清艾条内的艾绒制成重约1 g、底面直径约1 cm的圆锥形艾炷，隔药饼灸，每次灸1壮，每日1次，共14 d。
参考Murthy标
根据结肠黏膜的病理改变情况来进行评分。0分为结肠黏膜无损伤；1分为结肠黏膜轻度水肿，无溃疡；2分为结肠黏膜充血且粗糙呈颗粒状；3分为结肠黏膜形成 <1 cm的溃疡；4分为结肠黏膜溃疡1～2 cm，但和外周脏器没有粘连；5分为结肠黏膜溃疡1～2 cm，肠管增厚，且肠管和周围脏器粘连严重。
将结肠黏膜置于玻璃匀浆器中，加入PBS 匀浆，离心15 min，取上清液，采用ELISA法，检测各孔的吸光度值，计算TGF-β、Smad7及IL-10表达量。
TGF-β mRNA、Smad7 mRNA、IL-10 mRNA表达量 采用RT-PCR法检测。步骤：取100 mg组织于EP管，加1 mL Trizol匀浆、200 μL三氯甲烷，离心，取500 μL上清液于新EP管，加500 μL异丙醇，离心15 min，弃上清液，取RNA沉淀干燥至透明状，加150 μL RNase，溶解，混匀，取2 μL用于测定RNA浓度、质量。当OD260/OD280为1.8～2.0时质量较好，取2 μL进行逆转录，合成cDNA，用Real-time PCR检测。PCR扩增：95 ℃预变性2 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，40次循环，凝胶成像仪检测质量。用
造模后，空白组大鼠神情自然，灵活度好，肛周毛发干净，进食、二便无异常；各模型组大鼠都有耸毛、拱背、进食减少、活动减少甚至不动，伴有稀便。结合病理结果，判定UC造模成
空白组大鼠DAI、CMDI评分显著低于其他三组（P<0.05）；电针组、隔药灸组大鼠DAI、CMDI评分均明显低于模型组（P<0.05）；电针组、隔药灸大鼠DAI、CMDI评分比较，无统计学差异（P<0.05）。见
注： 与空白组比较
空白组大鼠结肠黏膜结构完整，无炎性细胞浸润、充血；模型组大鼠结肠黏膜结构较模糊，排列紊乱，腺体结构较不完整，大量炎性细胞浸润，并坏死、出血；电针组和隔药灸组大鼠结肠黏膜结构相对较完整，明显黏膜病变减少，腺体排列较连续，少量炎性细胞浸润。见
图2 光镜下各组大鼠的结肠病理组织（10×10）
注： A.空白组；B.模型组；C.电针组；D.隔药灸组
模型组、电针组、隔药灸组大鼠TGF-β mRNA、Smad7 mRNA及IL-10 mRNA表达量显著高于空白组（P<0.05），电针组、隔药灸组低于模型组（P<0.05）。见
注： 与空白组比较
与空白组比较，其他三组TGF-β、Smad7及IL-10表达量升高；与模型组比较，电针组、隔药灸组TGF-β、Smad7及IL-10表达量降低（P<0.05）。见
注： 与空白组比较
根据UC的临床症状及体征，当归属于中医学“泄泻”“久痢”范畴。《证治汇补》曰：“泄者，大便溏薄；泻者，大便直下，略分轻重，总属脾虚。”可见，UC的发病根本乃脾胃虚
天枢穴归足阳明胃经，乃阳明脉气所发之处，且其为大肠经募穴，参考腑病取募的取穴原则，天枢穴不仅可以有效通调大肠腑气、降浊化湿，而且还有益胃健脾、强身止泻作用。《素问·六微旨大论》云：“天枢之上，天气主之；天枢之下，地气主之。”说明此穴为升清降浊的穴位，可通调脏腑。《千金要方》记载：“大便泄数，并灸天枢。”《针灸大全》曰“泄泻不止，里急后重……天枢二穴。”《针灸大成》描述天枢主“主奔豚，泄泻……水痢不止，食不下，水肿腹胀肠鸣……冬月感寒泄痢”。气海穴乃全身气血汇集之所，可生发元气、培元益肾、扶正固本、益气温阳。《千金翼方》曰“水泄痢，灸气海百壮，三报之”“胀满瘕聚滞下疼冷，灸气海百壮”。天枢、气海相配，可以达到温养脾肾、通调气血、调和阴阳之功效。
电针是将电与针两种刺激方式相结合而防治疾病的一种方法，可以代替人做较长时间的持续运针，且能较客观地控制刺激量。相关研
隔药灸是将中药及艾灸的优势高度结合的一种灸法。本研究中，药饼的组成为附子、肉桂，二者皆大热，味辛，归脾、肾经，善补火助阳，相须为用则功效益彰，可健脾温肾以治其本。其中，附子为补助元阳之要药，具有温补肾阳、回阳救逆之功，《本草正义》曰：“附子辛温大热，性善走，故为通行十二经纯阳之要药。”肉桂具有温经通脉、引火归元、补火助阳之功效，乃治疗命门火衰之要药，《本草求真》曰其“大补命门相火，益阳治阴”。该法集穴、药、灸作用于一体，药物、艾灸对穴位可起到双重刺激作用。
本研究结果发现，空白组上皮结肠黏膜完整，未见充血、水肿，具有完整的腺体性结构，未见炎性细胞浸润；而模型组结肠黏膜破损，伴充血，腺体排列紊乱，炎性细胞大量浸润；电针组、隔药灸组上皮结肠黏膜组织损伤有不同程度修复，腺体量增多，排列较整齐，炎性细胞明显下降，表明电针及隔药灸均能促进黏膜修复且有效抑制炎症反应。
相关研
综上所述，电针及隔药灸可促使 UC大鼠结肠黏膜损伤修复，抑制炎症性反应，其作用机制可能与TGF-β/Smad7信号通路有关。电针及隔药灸如何调控TGF-β/Smad7信号通路发挥其治疗作用有待今后进一步研究。
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