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消积颗粒治疗大鼠盆腔炎性疾病后遗症的实验研  PDF

  • 谈忠毅 1
  • 谈瑄忠 1
  • 许慧琴 2
1. 南京中医药大学附属南京市中医院(江苏 南京 210022); 2. 南京中医药大学(江苏 南京 210023)

最近更新:2022-07-25

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摘要

目的

观察消积颗粒对盆腔炎性疾病后遗症模型大鼠的影响,并探究其治疗的作用机制。

方法

从50只SPF级未孕成年SD雌性大鼠中随机选取10只作为空白对照组,另40只大鼠采用苯酚法完成大鼠造模后,随机分为模型组和消积颗粒低、中、高剂量组,灌胃给药,每日1次,连续28 d。

结果

模型组大鼠出现行为迟缓、精神萎靡、毛发蓬松等现象,且体重明显降低,而消积颗粒低、中、高剂量组大鼠体征明显改善,体重在给药第2 w后明显增加,与模型组比较具有统计学差异(P<0.01);模型组血清IL-6、TNF-α较空白对照组显著升高,而消积颗粒低、中、高剂量组均较模型组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01);与空白对照组比较,模型组血清TXB2升高,PGF降低,TXB2/PGF比值提高,而消积颗粒低、中、高剂量组与模型组比较,TXB2均降低,PGF均升高,TXB2/PGF比值均降低,差异具有统计学意义(P<0.01);各组大鼠卵巢系数未见明显差异;模型组子宫系数较空白对照组显著升高,而消积颗粒中、高剂量组均能降低子宫系数,与模型组比较差异显著(P<0.05或P<0.01);模型组子宫内膜上皮细胞变性、坏死,宫壁结构改变,子宫腔粘连缩小、扩张或偏位,消积颗粒能够使子宫内膜上皮细胞变性、坏死及宫壁结构改变程度减轻,其中,中、高剂量组与模型组比较具有统计学差异(P<0.05)。

结论

消积颗粒治疗盆腔炎性疾病后遗症是通过改善体征和体重,降低炎症因子、减轻炎症反应和血瘀、改善血液循环、降低子宫系数、减轻炎症反应等环节发挥作用。

盆腔炎性疾病(pelvic inflammatory disease,PID)是指女性上生殖道及其周围组织感染造成的一组疾病,包括盆腔腹膜炎、输卵管炎、子宫内膜炎和输卵管卵巢脓肿等,若得不到及时治疗,可能造成异位妊娠、慢性盆腔痛、不孕以及炎症反复发作等后遗症的发生,即盆腔炎性疾病后遗症(Sequelae of Pelvic Inflammatory Disease,SPID)。SPID多发于育龄妇女,其可出现组织被广泛的破坏和粘连、组织增生及瘢痕形成等病理改变,严重影响患者的身心健[1]。中医治疗SPID具有明显的优势,消积颗粒是南京中医药大学附属南京中医院的院内制剂,是高淑华主任医师的经验[2]。本方由赤芍、红花、香附、蒲公英、生薏苡仁、昆布等药味组成,临床上可明显改善SPID患者的症状。本实验旨在研究消积颗粒对SPID模型大鼠的影响,探究其治疗机制,为SPID的临床治疗及新药开发提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药物

消积颗粒(由南京中医药大学附属南京中医院制剂部提供,批号:20160311)。

1.1.2 试剂

苯酚(成都市科龙公司,批号:20130515);黄耆树胶(国药集团,批号:W20111220);大鼠白细胞介素-6(IL-6)试剂盒(上海酶联生物有限公司,批号:201606);大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)试剂盒(上海酶联生物有限公司,批号:201606);大鼠血栓素B2(TXB2)(上海酶联生物有限公司,批号:201606);大鼠前列腺素1α(PGF)(上海酶联生物有限公司,批号:201606)。25%苯酚胶浆配制:取西黄芪胶1 g置干燥坩埚内,加4 mL甘油研磨均匀,再加液化苯酚5 mL,继续研磨至均匀状态,最后加蒸馏水11 mL研磨至浓稠均匀无颗粒。

1.1.3 动物

SPF级未孕成年SD雌性大鼠,体重200~220 g,由浙江省实验动物中心提供,实验动物使用许可证号:SYXK(苏)2014-0001。

1.1.4 仪器

TD 6001电子天平(天津市天马公司);FA2104电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司);CKX-31生物显微镜(日本奥林巴斯);Synergy HT多功能酶标仪(美国BioTeK);LDZ5-2离心机(北京医用离心机厂)。

1.2 实验方[3-4]

1.2.1 造模

取雌性大鼠50只,随机选取40只大鼠采用腹腔麻醉(10%水合氯醛溶液4 mL/kg),常规消毒后,下腹正中切口约2 cm,暴露子宫,在右侧子宫中段处以4号针头小心进针,向卵巢方向缓慢注入苯酚胶浆0.04 mL/只,再逐层缝合切口,进行正常饲养。保留10只不造模作为空白对照。

1.2.2 分组及给药

造模7 d后,将40只大鼠按体重分层随机分为4组,每组10只,分别为模型组及消积颗粒低、中、高剂量组。消积颗粒低、中、高剂量组的给药剂量分别为2.6 g/kg、5.2 g/kg、10.4 g/kg;空白对照组、模型组则给予生理盐水。各组按上述剂量灌胃给药(10 mL/kg),每日1次,连续28 d。

1.3 观察指标

1.3.1 体征观察及体重

每天观察大鼠的毛发、精神、行为等体征状况;分别在给药前、给药后第1、2、3、4 w测定大鼠体重。

1.3.2 血液生化指标

末次给药后次日大鼠眼眶取血5 mL,待静置1 h后,离心10 min(3000 rpm),取血清,保存温度为-20 ℃,后期用于测定血清TXB2、IL-6、TNF-α、PGF等指标。

1.3.3 脏器系数

脱颈椎处死大鼠,取出子宫、卵巢,称重并计算其系数。

1.3.4 病理组织学检查

取材后,将右侧子宫用10%甲醛溶液固定后,脱水,石蜡包埋。切片经HE染色,用光学显微镜进行观察。病理观察指标为:(1)子宫内膜上皮细胞变性坏死状况;(2)子宫壁慢性炎细胞浸润状况;(3)子宫腔扩张、粘连或闭塞状况;(4)子腔壁结构改变状况;(5)子宫内膜充血水肿状[5]。第1、3项指标积分标准为:0分为无病变;1分为范围<1/3的轻度病变;2分为范围在1/3~2/3间的中度病变;3分为范围在2/3以上的重度病变。第2、4、5项指标根据病变严重程度计分:无明显病变为0分;轻度病变为1分,中度病变为2分,重度病变为3[5]

1.4 统计方法

采用SPSS 16.0统计软件包,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用t检验。

2 结果

2.1 对体征及体重的影响

模型组大鼠出现行为迟缓、精神萎靡、毛发蓬松等现象,且体重明显减轻,与空白对照组比较具有统计学差异(P<0.05或P<0.01);而消积颗粒低、中、高剂量组大鼠体征明显改善,体重在给药第2 w后明显增加,与模型组比较具有统计学差异(P<0.01)。见表1

表1  各组大鼠体重的变化情况(x¯±s
组 别剂量(g/kg)给药前体重(g)给药后体重(g)
1 w2 w3 w4 w
空白对照组 - 222.3±5.5 230.5±6.0 240.1±5.7 249.8±7.7 255.4±7.5
模型组 - 217.3±6.4 223.7±6.5# 219.4±8.1## 217.4±7.9## 217.7±6.6##
消积颗粒低剂量组 2.6 217.7±7.3 226.6±5.9 233.6±4.6** 241.8±6.0** 250.4±8.5**
消积颗粒中剂量组 5.2 214.7±7.5 223.7±7.4 232.7±7.1** 242.0±5.5** 250.9±7.7**
消积颗粒高剂量组 10.4 216.6±8.7 226.0±8.2 235.3±5.6** 243.6±6.2** 253.8±7.9**

注:  与空白对照组比较#P<0.05##P<0.01;与模型组比较**P<0.01

2.2 各组大鼠IL-6、TNF-α水平比较

模型组血清IL-6、TNF-α较空白对照组显著升高,而消积颗粒低、中、高剂量组IL-6、TNF-α均较模型组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。见表2

表2  各组大鼠血清IL-6、TNF-α水平比较(x¯±s
组 别剂量(g/kg)IL-6(pg/mL)TNF-α(ng/L)
空白对照组 - 58.13±12.67 179.83±29.21
模型组 - 189.34±9.40## 576.51±33.42##
消积颗粒低剂量组 2.6 147.59±6.10** 475.06±29.89**
消积颗粒中剂量组 5.2 120.98±6.17** 346.26±33.42**
消积颗粒高剂量组 10.4 99.60±18.57** 275.18±49.95**

注:  与空白对照组比较##P<0.01; 与模型组比较**P<0.01

2.3 各组大鼠TXB2、PGF水平及其比值比较

与空白对照组比较,模型组血清中的TXB2升高,PGF降低,TXB2/PGF比值提高,两组差异具有统计学意义(P<0.01);而消积颗粒低、中、高剂量组均能降低TXB2,升高PGF,使其TXB2/PGF比值降低,与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。见表3

表3  各组大鼠血清TXB2、PGF水平及其比值比较(x¯±s
组 别剂量(g/kg)TXB2(ng/L)PGF(ng/L)TXB2/PGF
空白对照组 - 173.09±19.79 895.99±92.04 0.20±0.03
模型组 - 527.61±32.60## 400.58±74.74## 1.35±0.23##
消积颗粒低剂量组 2.6 422.52±27.43** 530.96±97.36** 0.82±0.16**
消积颗粒中剂量组 5.2 360.27±43.53** 595.98±89.73** 0.62±0.13**
消积颗粒高剂量组 10.4 267.71±30.19** 699.37±64.17** 0.39±0.07**

注:  与空白对照组比较##P<0.01;与模型组比较*P<0.05**P<0.01

2.4 各组大鼠卵巢、子宫脏器系数比较

各组大鼠卵巢系数未见明显差异;模型组子宫系数显著升高,与空白对照组比较具有统计学差异(P<0.01);而消积颗粒中、高剂量组均能降低子宫系数,与模型组比较差异显著(P<0.05或P<0.01)。见表4

表4  各组大鼠卵巢及子宫系数比较(x¯±s
组 别剂量(g/kg)卵巢系数(%)子宫系数(%)
空白对照组 - 0.04±0.01 0.17±0.07
模型组 - 0.05±0.01 0.48±0.14##
消积颗粒低剂量组 2.6 0.04±0.01 0.38±0.13
消积颗粒中剂量组 5.2 0.04±0.01 0.33±0.13*
消积颗粒高剂量组 10.4 0.05±0.01 0.31±0.10**

注:  与空白对照组比较##P<0.01;与模型组比较*P<0.05**P<0.01

2.5 病理组织学检查

模型组大鼠的病理表现为子宫内膜上皮细胞变性、坏死,宫壁结构改变,子宫腔粘连缩小、扩张或偏位,与空白对照组比较有统计学差异(P<0.01)。在使用消积颗粒后,子宫内膜上皮细胞变性、坏死及宫壁结构改变程度减轻,其中,中、高剂量组与模型组比较差异显著(P<0.05)。见表5图1

表5  各组大鼠子宫病理学评分结果(x¯±s
组 别剂量(g/kg)病理综合评分(分)
空白对照组 - 2.00±1.80
模型组 - 5.90±2.60##
消积颗粒低剂量组 2.6 5.30±2.36
消积颗粒中剂量组 5.2 3.75±1.39*
消积颗粒高剂量组 10.4 2.90±2.08*

注:  与空白对照组比较##P<0.01;与模型组比较*P<0.05

  空白对照组A(HE 100×)

  空白对照组B(HE 100×)

  模型组A(HE 100×)

  模型组B(HE 100×)

  消积低剂量组A(HE 100×)

  消积低剂量组B(HE 100×)

  消积中剂量组A(HE 100×)

  消积中剂量组B(HE 100×)

  消积高剂量组A(HE 100×)

  消积高剂量组B(HE 100×)

图1 各组大鼠子宫病理学检查结果

3 讨论

盆腔炎性疾病是妇科临床发病率较高的疾病,易反复发作,临床症状有下腹疼痛坠胀、腰痛、月经不调等,甚者可导致异位妊娠、输卵管阻塞和不[6]。该病可归属于中医学“妇人腹痛”“热入血室”“癥瘕”“不孕”等范[2]。中医临床实践认为,盆腔炎性疾病后遗症主要呈现“湿、热、瘀”的病理状态,究其病机特点,主要为湿热余毒为患。现代研究亦表明,盆腔炎患者的血液呈浓、黏、凝、滞 状态,符合中医学“血瘀证”特点。本实验采用较为成熟的苯酚胶浆致炎法造模,造模7天后肉眼观察模型组大鼠出现精神萎靡、行为迟缓、毛发蓬松等现象,且体重明显降低;病理主要表现为模型组子宫内膜上皮细胞突变坏死,宫壁结构改变,子宫腔粘连缩小、扩张或偏[7]。消积颗粒能够改善SPID大鼠的体征和体重,使子宫内膜上皮细胞突变坏死、宫壁结构改变程度减轻。 IL-6作为