摘要
通过检索TCMSP和CNKI筛选胆黄润肠丸药物组成的有效成分，依靠PharmMapper预测活性成分靶点，应用Uniprot校正靶点基因名，并借助Cytoscape构建胆黄润肠丸的“药物-活性成分-靶点”网络；利用OMIM和Genecards检索慢传输型便秘的疾病基因，将“药物-疾病”交集靶点应用STRING数据库和Cytoscape构建PPI；应用Metascape数据库进行GO和KEGG的富集分析，并由此预测胆黄润肠丸的作用机制。
从胆黄润肠丸中筛选出24个活性成分，获得对应97个药物靶点；检索到1005个慢传输型便秘关联疾病靶点，其中38个为“药物-疾病”交集靶点，ALB、EGFR、CASP3、ESR1、HSP90AA1等为核心交集靶点；GO富集包括类固醇激素的反应、对营养水平的反应、囊泡腔、膜筏、蛋白激酶结合、蛋白域特异性结合等；KEGG富集涉及癌症通路、IL-17信号通路、雌激素信号通路等。
慢传输型便秘（slow transit constipation, STC）约占便秘的16%～40%，是功能性便秘的常见类型，多见于老年人和女性患
胆黄润肠丸（苏药制字Z04001225）由大黄和猪胆膏两味中药组成，为江苏省常州市中医医院全国名老中医周玉祥教授遵循“六腑以通为用”“六腑以通为补”的治则而拟的临证经验方，具有润肠通便、清热解毒的功效，临床适用于痔疮手术及便秘等病症，对老年功能性便秘效果尤
用关键词“大黄”检索中药系统药理数据库和分析平台TCMSP（https://tcmsp-e.com），以口服利用度（OB）≥30%、类药性（DL）≥0.18作为大黄活性成分的筛选标
汇总大黄活性成分的mol2文件与猪胆粉活性成分的sdf文件，借助药效团匹配与潜在识别靶标平台PharmMapper（http://lilab-ecust.cn/pharmmapper/）预测胆黄润肠丸活性成分的潜在靶点。靶标选择“Human Protein Targets Only”，获取大黄与猪胆粉活性成分的csv文件后，以Norm Fit>0.9作为有效靶点的筛选条件，并通过蛋白质数据库Uniprot（https://www.uniprot.org)进一步规范靶点基因名，将其校正为官方名。
将大黄和猪胆粉有效靶点的基因信息整理为胆黄润肠丸的network文件和type文件，利用生物信息分析软件Cytoscape3.7.1构建胆黄润肠丸的“药物-活性成分-靶点”网络。根据节点度值（Degree）调整图标尺寸和颜色深浅，并将活性成分节点按度值大小顺序排列。
用关键词“slow transit constipation”检索在线《人类孟德尔遗传》数据库OMIM（https://omim.org）和人类基因综合数据库Genecards（https://www.genecards.org），两库筛选得到的靶点进一步整合去重即为慢传输型便秘的关联靶点。将胆黄润肠丸和慢传输型便秘关联靶点上传在线平台Venny2.1（https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny），获得“药物-疾病”交集靶点及韦恩图。
应用蛋白互作数据库STRING（https://www.string-db.org）构建交集靶点的互作网络（PPI），“Multiple proteins”菜单栏输入“药物-疾病”交集靶点列表，“Organism”项选择“Homo sapiens”，“medium confidence”设置为0.4，获得“化合物-疾病”交集靶点PPI。将下载的tsv文件导入Cytoscape3.7.1软件，根据靶点相互作用的度值重新布局“化合物-疾病”交集靶点互作网络。
应用Metascape（https://www.metascape.org）数据库进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）的富集分析，输入“药物-疾病”交集靶点列表，“Input as species”选择“H.sapiens”，点击“Custom Analysis”进入Enrichment菜单页，“P Value Cutoff”设置为0.01，分别对KEGG和GO进行富集分析。“Analysis Report Page”页截取GO通路信息，借助生信结果作图网站微生信（http://www.bioinformatics.com.cn）制作GO富集BP、MF、CC三合一柱状图，以及KEGG富集气泡图。
TCMSP数据库共检索到大黄成分92个，以OB≥30%、DL≥0.18为筛选标准，获得大黄活性成分16个，详见
以Norm Fit>0.9为筛选标准，借助PharmMapper平台共得到大黄潜在靶点421个、猪胆粉潜在靶点189个。通过蛋白质数据库Uniprot的Retrieve/ID mapping功能进一步规范潜在靶点的基因名，去重后最终获得胆黄润肠丸活性成分潜在靶点97个。
利用Cytoscape3.7.1构建胆黄润肠丸的“药物-活性成分-靶点”网络，如
图1 胆黄润肠丸“药物-化合物-靶点”网络图
用关键词“slow transit constipation”检索OMIM和Genecards数据库，去重后得到慢传输型便秘相关靶点1005个。借助在线平台Venny2.1绘制胆黄润肠丸与慢传输型便秘交集靶点韦恩图，共得到“药物-疾病”交集靶点38个，详见
图2 胆黄润肠丸-慢传输型便秘交集靶点图
应用STRING数据库构建“药物-疾病”交集靶点互作网络，可知该网络由38个节点、211条边组成，平均节点度值为11.1。借助Cytoscape3.7.1重新布局交集靶点互作网络，如
图3 胆黄润肠丸-慢传输型便秘交集靶点互作网络图
应用Metascape数据库进行胆黄润肠丸与慢传输型便秘38个交集靶点的GO和KEGG富集分析，并通过微生信可视化平台在线作图。由GO富集分析图（
图4 胆黄润肠丸-慢传输型便秘交集靶点GO富集分析图
图5 胆黄润肠丸-慢传输型便秘交集靶点KEGG气泡图
大黄始载于《神农本草经》，历来为通下要药，因其药性“劲利”“骏快”，被陶弘景誉为“将军
笔者构建“药物-疾病”交集靶点PPI时发现，ALB、EGFR、CASP3、ESR1、HSP90AA1等为PPI核心靶点。ALB是血清白蛋白，有研究发现，便秘症状缓解患者的ALB水平显著提高，与患者营养状况改善有
由KEGG富集结果可见，胆黄润肠丸治疗STC主要涉及癌症、IL-17、雌激素等信号通路。Cajal间质细胞（ICC）是胃肠道慢波起搏细胞，平滑肌张力感受器，可传导肠神经与平滑肌间的神经信号。郑宏群等发现，腹腔注射TNF-α（肿瘤坏死因子α）的鼠小肠ICC及细胞网络均有不同程度损伤，推测TNF-α与ICC线粒体损伤存在一定关联性，也是导致消化道动力障碍的诱
综上，笔者运用网络药理学初步探究了胆黄润肠丸治疗STC的主要活性成分、核心靶点以及作用机制，为今后开展相关临床研究提供参考。该研究还比较局限，如：胆黄润肠丸由大黄和猪胆粉两味中药经混合粉碎泛制而成，饮片粉碎和喷洒粘合剂（水或乙醇）的过程中可能会产生一些新的化合物，这些化合物的生物活性和作用机理还是个未知数，有待进一步研究和探讨。
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