消风宣窍汤对变应性鼻炎豚鼠免疫调节作用研究

夏晨; 汪受传; 李萌; 魏肖云

网刊加载中。。。

使用Chrome浏览器效果最佳，继续浏览，你可能不会看到最佳的展示效果，

确定继续浏览么?

复制成功，请在其他浏览器进行阅读

消风宣窍汤对变应性鼻炎豚鼠免疫调节作用研究 PDF

- ORCID：
夏晨 ¹
- ORCID：
汪受传 ²
✉
- ORCID：
李萌 ³
- ORCID：
魏肖云 ⁴

1. 南京医科大学附属儿童医院（江苏南京 210017）； 2. 南京中医药大学（江苏南京210029）； 3. 首都儿科研究所附属儿童医院（北京 100020）； 4. 扬州市广陵区中医院（江苏扬州 225001）

最近更新：2022-02-07

目录contents

摘要

目的

探究消风宣窍汤对变应性鼻炎豚鼠的免疫调节作用。

方法

40只Hartley豚鼠被随机分成正常组、模型组、消风宣窍汤组及氯雷他定组，每组各10只。建立变应性鼻炎豚鼠模型，药物干预7 d后，比较各组豚鼠鼻部症状行为学评分、鼻黏膜分泌物阳性细胞计数、血清IgE、组胺及Th1、Th2、Th17相关细胞因子水平。

结果

与模型组相比，消风宣窍汤组及氯雷他定组的鼻部症状行为学评分、两种阳性细胞计数、血清IgE、组胺、NF-κB、IL-4、IL-6、IL-17水平、病理组织评分均明显降低（P<0.05），IFN-γ、IL-12水平均明显升高（P<0.05）；消风宣窍汤组的血清IgE、组胺水平较氯雷他定组下降更明显，差异有统计学意义（P<0.05）。

结论

消风宣窍汤可有效改善鼻部症状行为学评分，减少鼻黏膜分泌物阳性细胞计数，降低Th2相关细胞因子IL-4、IL-6水平，并增高Th1相关细胞因子IFN-γ、IL-12水平，同时还抑制了血清NF-κB、IL-17的表达，减少IgE的合成及组胺的释放，达到免疫调节的作用。

关键词

消风宣窍汤; 变应性鼻炎; 细胞因子

变应性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是由于变应原刺激特应性个体，导致鼻黏膜产生IgE，进而使得各种免疫细胞共同作用的I型变态反应，属于祖国医学中“鼻鼽”范畴。近年来，AR患病率逐渐增加。目前西医多使用鼻用糖皮质激素、第二代抗组胺药等来控制AR症状，但停药后症状容易复发；而中药治疗既可减轻AR症状，还能改善机体免疫功能，受到越来越多学者的关注。汪受传教授从“伏风”论治，自拟消风宣窍汤治疗小儿鼻鼽，临床效果好，不良反应少，有独特的优势^[

1]。前期研究已经证实，消风宣窍汤治疗儿童AR的作用机制与免疫调节相关^{[参考文献 2

百度学术}2]。本实验以AR模型豚鼠为实验对象，进一步探究其免疫调节的作用机制。

1 材料与方法

1.1　实验动物

40只Hartley豚鼠，体重（300±35）g，清洁级，4~5 w龄，雄性，来源于南京中医药大学实验动物中心，动物许可证号为SCXK（苏）（2012-0008）。

1.2　药品与试剂

（1）消风宣窍汤（由炙麻黄3 g、桂枝3 g、辛夷3 g、苍耳子6 g、五味子6 g、乌梅6 g、胆南星6 g、广地龙6 g组成)，来源于南京中医药大学附属医院中药房制成浓缩滤液，生药含量为1.05 g/mL；（2）氯雷他定来源于上海先灵葆雅制药有限公司（批号为10KRXF1047），规格为10 mg/片，用蒸馏水稀释为0.1 g/mL；（3）卵白蛋白（OVA)来源于美国Sigma公司（批号为326A05）；（4）氢氧化铝凝胶来源于上海美兴化工有限公司（批号为2008050）；（5）酶联免疫吸附(ELISA)检测试剂盒来源于美国R＆D公司（批号为201304）。

1.3　仪器与设备

DMIL型倒置显微镜来源于德国Leica公司；EXL 800型酶标仪来源于美国BioTek公司。

1.4　分组、建模及给药

40只Hartley豚鼠被随机分成正常组、模型组、消风宣窍汤组、氯雷他定组，每组10只。在正式试验之前，将每只豚鼠鼻腔分泌物行Wright染色，观察嗜酸性粒细胞（EOS）的分布情况，发现染色结果均为阴性。除正常组外，其余3组采用OVA模型的建立方法^[

3]制备豚鼠变应性鼻炎模型，并用鼻部分泌物EOS分布情况、鼻部症状行为学评分评估造模成功与否（局部致敏30 min，若鼻腔分泌物涂片EOS阳性且鼻部症状行为学评分总分>5分，表示AR豚鼠模型构建成功）。待造模成功，按照1岁儿童临床等效剂量并根据《药理试验方法学》公式进行人和动物给药剂量的换算，消风宣窍汤组等效剂量为14 g/（kg·d），氯雷他定组等效剂量为1.88 mg/（kg·d）。给药方式为消风宣窍汤组、氯雷他定组每只豚鼠每8 h灌胃1次，每日2次；AR模型组、正常组则按照相同次数、方法给予相等量的生理盐水。共灌胃7 d。

1.5　观察指标

1.5.1　鼻部行为学观察

给药7 d后，对豚鼠给予致敏物，给致敏物即开始计时，共计时30 min，观察各组豚鼠鼻部症状、行为，根据过敏反应行为的评分标准评分^[

3]：喷嚏次数1～3次为1分，4～10次为2分，≥11次为3分；擦鼻次数1～4次为1分，4次以上为4分；清涕流至前鼻孔为1分，超出前鼻孔为2分，涕流满面为3分。

1.5.2　鼻黏膜分泌物阳性细胞计数

鼻部行为学观察后，将每只豚鼠鼻腔分泌物涂片滴加Wright染色液，油镜下每张涂片观察10个视野(视野倍数：10×40)，分别计算嗜酸性粒细胞(EOS)和肥大细胞(MC)的比率。

1.5.3　免疫指标

鼻黏膜分泌物涂片后，麻醉豚鼠，采颈动脉血5 mL，以3000 r/min离心10 min，分离出血清，并于-70 ℃冰箱保存。用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测四组豚鼠的血清IgE、组胺及Th1、Th2、Th17细胞相关细胞因子水平。

1.5.4　病理指标

豚鼠取血后处死，取出其鼻腔黏膜组织，在4%多聚甲醛溶液中固定72 h，依次经过75%-85%-95%-100%梯度酒精脱水、二甲苯透明、常规石蜡包埋。以4～5 µm切片，最后行HE染色，观察高倍镜下各组豚鼠的鼻黏膜组织学改变情况，并进行病理变化分级评分^[

3]。

1.6　统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件进行处理。数据以均数±标准差( $\bar{x} \pm s$ )表示。采用单因素方差分析进行组间比较，采用Bonferroni法进行两两比较。P<0.05表示有统计学差异。

2 结果

2.1　豚鼠死亡情况

实验过程中，共死亡10只豚鼠。正常组不明原因死亡1只；模型组因鼻塞严重死亡2只；消风宣窍汤组因鼻塞死亡1只；氯雷他定组因鼻塞死亡1只、不明原因死亡1只。治疗结束后各组豚鼠数量如下：正常组9只，模型组8只，消风宣窍汤组9只，氯雷他定组8只。经比较，各组豚鼠死亡数量差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2　各组豚鼠鼻部症状行为学评分比较

模型组的各项症状及症状积分明显高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比，消风宣窍汤组与氯雷他定组的各项症状及症状积分均明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；而消风宣窍汤组与氯雷他定组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 各组豚鼠鼻部症状行为学评分比较（分，

\bar{x} \pm s

）

组别	n	流涕	擦鼻	喷嚏	症状积分
正常组	9	0.00±0.00	0.12±0.35	0.25±0.46	0.37±0.13
模型组	8	2.14±0.69^a	2.47±0.53^a	2.71±0.48^a	8.75±1.67^a
消风宣窍汤组	9	1.00±0.00^ab	1.33±0.57^ab	1.00±0.81^ab	6.00±0.53^ab
氯雷他定组	8	1.20±0.83^ab	1.71±0.75^ab	1.51±0.53^ab	6.25±0.71^ab

注：与正常组相比，^aP<0.05；与模型组比较，^bP<0.05

2.3　各组豚鼠鼻黏膜分泌物阳性细胞计数比较

和正常组比较，模型组豚鼠鼻腔分泌物中EOS、MC计数均有明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。和模型组比较，消风宣窍汤组和氯雷他定组两种阳性细胞计数值均明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；而消风宣窍汤组与氯雷他定组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

表 2 各组豚鼠鼻黏膜分泌物EOS、MC计数比较（

\bar{x} \pm s

）

分组	n	EOS（％）	MC（％）
正常组	9	0.33±0.50	0.55±0.52
模型组	8	13.12±1.88^a	10.50±1.41^a
消风宣窍汤组	9	7.75±1.28^ab	5.87±1.12^ab
氯雷他定组	8	7.70±1.05^ab	6.50±0.85^ab

注：和正常组相比，^aP<0.05；和模型组比较，^bP<0.05

2.4　各组豚鼠血清IgE、组胺水平比较

模型组豚鼠血清IgE、组胺水平较正常组明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。和模型组相比，消风宣窍汤组与氯雷他定组豚鼠血清IgE、组胺水平显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）；消风宣窍汤组较氯雷他定组下降更明显，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 各组豚鼠血清IgE、组胺水平比较（

\bar{x} \pm s

）

分组	n	IgE(μg/mL)	组胺（ng/mL）
正常组	9	117.57±5.00	12.58±0.92
模型组	8	224.00±9.09^a	16.31±0.10^a
消风宣窍汤组	9	139.50±1.80^abc	28.14±0.05^abc
氯雷他定组	8	191.03±7.31^ab	34.46±2.01^ab

注：和正常组相比，^aP<0.05；和模型组比较，^bP<0.05；和氯雷他定组比较，^cP<0.05

2.5　各组豚鼠Th1、Th2、Th17细胞相关细胞因子水平比较

与正常组相比，模型组豚鼠血清中的NF-κB、IL-4、IL-6、IL-17水平均明显升高，IFN-γ、IL-12水平明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比，消风宣窍汤组及氯雷他定组豚鼠血清中NF-κB、IL-4、IL-6、IL-17水平均显著降低，IFN-γ、IL-12水平明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。消风宣窍汤组与氯雷他定组各细胞因子水平相比，差异无统计学意义（P>0.05）。见表4。

表4 各组豚鼠血清中Th17、Th1、Th2 细胞相关细胞因子水平比较（

\bar{x} \pm s

）

分组	n	NF-κB（pg/mL）	IL-4（pg/mL）	IL-6(ng/L)	IFN-γ（pg/mL）	IL-12(μg/L)	IL-17(ng/L)
正常组	9	329.58±38.11	36.46±1.16	99.05±1.25	43.69±1.23	17.37±1.25	180.21±7.69
模型组	8	480.22±24.55^a	45.30±2.62^a	133.84±2.51^a	32.14±1.13^a	10.58±0.66^a	230.35±11.90^a
消风宣窍汤组	9	398.54±41.23^ab	28.14±0.05^ab	110.29±5.13^ab	36.70±2.00^ab	15.18±1.31^ab	203.93±16.30^ab
氯雷他定组	8	348.80±20.36^ab	34.46±2.01^ab	111.01±4.52^ab	36.18±0.45^ab	16.90±0.72^ab	202.11±7.47^ab

注：和正常组相比，^aP<0.05；和模型组比较，^bP<0.05

2.6　各组豚鼠病理组织评分比较

正常组的豚鼠鼻黏膜组织结构基本正常，HE染色未见EOS。模型组鼻黏膜组织上皮细胞坏死脱落或化生，固有层组织水肿，大量EOS浸润，腺体增生明显，病理组织评分明显高于正常组，差异有统计学意义（P<0.05）。消风宣窍汤与氯雷他定组的上述病理学改变均有所减轻，鼻黏膜组织炎性反应明显减轻，黏膜血管轻度扩张，稍有水肿，病理组织评分明显低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。消风宣窍汤组与氯雷他定组的病理组织评分比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表5。

表5 各组豚鼠鼻黏膜病理组织评分比较（分，

\bar{x} \pm s

）

组别	例数	评分
正常组	9	0.22±0.44
模型组	8	2.75±0.46^a
消风宣窍汤组	9	1.50±0.75^ab
氯雷他定组	8	1.37±0.51^ab

注：和正常组相比，^aP<0.05；和模型组比较，^bP<0.05

3 讨论

AR已经成为儿童主要呼吸道慢性炎症性疾病，有报道^[

4]显示2016年美国儿童变应性鼻炎的自报患病率达到40%，确诊患病率为13%。2020年内蒙古12个市6~18岁儿童青少年变应性鼻炎的标化自报患病率为18.20%，标化确诊患病率为9.71%^{[参考文献 5

百度学术}5]。尽管有很多治疗AR的西药，如抗组胺药、鼻用糖皮质激素、鼻减充血剂和肥大细胞稳定剂等，但长期治疗的不良反应多，复发率高。因此，对改善过敏症状的新方法或替代方法的需求日益增加。临床研究显示消风宣窍汤不仅可治疗患儿变应性鼻炎发作症状，而且可以逐步改善患儿过敏体质，减少鼻鼽反复发作，长期应用不良反应少^{[参考文献 6

百度学术}6]，但其作用机制尚不清楚。本研究通过实验研究初步探讨了消风宣窍汤治疗AR的免疫作用机制。

AR是以IgE明显升高为特征的I型变态反应疾病，发病机制复杂，重要原因之一为Th1/Th2平衡失调。纠正Th1/Th2细胞的分化、Th1/Th2细胞因子分泌的失衡，可有效抑制变应性炎症反应。IL-4为Th2细胞重要的特征因子之一，可以诱导免疫球蛋白IgM至IgE的同型转换，使得MC的脱颗粒作用增强。通过Pearson相关性分析表明，AR感染后血清IL-4水平与其SFAR、VAS评分以及外周血清IgE均呈正相关^[

7]。IFN-γ能激活巨噬细胞，促进静止的Th0细胞向Th1细胞的分化，还能抑制Th2细胞的增殖^{[参考文献 8

百度学术}8]。IL-4和IFN-γ的表达异常提示Th细胞的分化偏移。IL-4逐渐增多和IFN-γ减少，乃是变应性鼻炎机体内 IgE合成增多的主要机制，INF-γ在AR炎症早期发生可能起主导作用，而IL-4在晚期发展可能发挥主要作用^{[参考文献 9

百度学术}9]。IL-6是Th2细胞分泌的另一种重要的细胞因子，参与多种靶细胞黏附和集聚，并具有重要的免疫调节功能，可提示气道炎症的活跃程度，促进气道炎症的发生和气道结构重建。研究证实IL-6在CRS的鼻腔黏膜高表达^{[参考文献 10

百度学术}10]。IL-12是诱导Th0向Th1细胞分化的重要因素，可促进产生Th1型细胞因子，并抑制Th2型细胞因子，还可以通过抑制IL-4发育从而拮抗Th2型细胞应答。IL-12为诱导产生IFN-γ的最主要的细胞因子^{[参考文献 11

百度学术}11]。当血清IL-12过高表达时，EOS分化、生成得到抑制，使进入靶组织的EOS和T细胞减少，进一步抑制由IgE介导的I型变态反应，改善AR症状^{[参考文献 12

百度学术}12]。NF-κB参与炎症和免疫反应，并起枢纽作用，可调节各类炎症递质和免疫因子之间的级联放大连锁效应，因此抑制其激活可有效防止AR的产生^{[参考文献 13

百度学术}13]。NF-κB表达增加，可诱发Th2细胞因子IL-4等分泌，从而促进B淋巴细胞合成IgE，同时增强EOS的黏附聚集^{[参考文献 14

百度学术}14] 。Th17细胞可上调Th2细胞介导的嗜酸性气道炎症，IL-17是其分泌的特征性细胞因子，可增强气道平滑肌收缩和气道上皮细胞对变应原的通透性^{[参考文献 15

百度学术}15]。IL-17可增加气道上皮细胞黏液的表达，并通过NF-κB依赖通路激活黏液蛋白基因表达和蛋白生成^{[参考文献 16

百度学术}16]。炎症性疾病和自身免疫性疾病发生可能与IL-17过度产生有关。

本研究显示，消风宣窍汤治疗后可减轻豚鼠流涕、擦鼻、喷嚏等AR症状，显著减少鼻腔分泌物中EOS和MC计数，降低血清中IgE、组胺水平，证实了消风宣窍汤可以减轻局部免疫反应，起到抗炎、抗过敏的作用，并可以改善鼻黏膜的病理损伤。其中消风宣窍汤治疗后豚鼠血清IgE、组胺水平下降较氯雷他定组更为明显，提示消风宣窍汤抗过敏方面可能更有优势。AR感染前，各细胞因子之间相互联系、协调及作用，Th1和Th2则通过这些细胞因子的变化保持着动态平衡。临床证实AR感染后，存在Th1/Th2平衡被破坏及Th17细胞比例升高的情况^[

17]。本研究通过豚鼠感染前后细胞因子情况的对比，得到了类似的结论，并通过观察Th17、Th1、Th2细胞分泌的不同细胞因子的水平变化，证实消风宣窍汤治疗后可以降低豚鼠血清Th2相关细胞因子IL-4、IL-6含量，增高Th1分泌 IFN-γ、IL-12相关细胞因子的含量，同时抑制了血清NF-κB、Il-17表达，其细胞因子的水平变化较氯雷他定组无显著差异。通过本次实验研究，推测消风宣窍汤治疗变应性鼻炎模型可能通过降低机体Th2相关细胞因子含量，同时升高Th1相关细胞因子含量，来抑制Th2免疫反应，增强Th1的免疫反应，纠正Th1/Th2 免疫失衡来治疗疾病，也提示调节机体中Th1/Th2、IL-17免疫平衡状态成为该疾病新的治疗方向^{[参考文献 18

百度学术}18]。

参考文献

邹建华,汪受传.汪受传教授自拟消风宣窍汤治疗小儿鼻鼽经验[J].成都中医药大学学报，2018,41(4):72-74. [百度学术]

魏肖云,汪受传.消风宣窍汤对变应性鼻炎豚鼠模型 NGF 和IL-5 表达的影响及其相关性[J].中医儿科杂志，2014,10(2):21-24. [百度学术]

中华中医药学会中药实验药理专业委员会.变应性鼻炎动物模型制备规范(草案)[J].中草药，2018,49(1):50-57. [百度学术]

MELTZER EO.Allergic Rhinitis:Burden of Illness,Quality of Life,Comorbidities, and Control[J].Immunology and allergy clinics of North America,2016,36(2):235-48. [百度学术]

赵羽芊.内蒙古地区６-18岁儿童青少年变应性鼻炎的流行病学特征及其影响因素[D].内蒙古:内蒙古医科大学，2021. [百度学术]

CORSICO AG,DE AMICI M, RONZONI V,et al.Allergen- specific immunoglobulin E and allergic rhinitis severity[J].Allergy Rhinol(Providence),2017,8(1):1-4. [百度学术]

曹慧，郑成彩，杜小燕.IL-4、PPAR-γ表达与过敏性鼻炎疾病活动度的相关性分析[J].现代医学，2021,49(8):970-974. [百度学术]

张清全，姜孝芳，孙勇，等.新疆维、汉人群变应性鼻炎患者与正常人表观遗传现象IFN-γ基因甲基化比较研究[J].免疫学杂志,2012,28(1):54-58. [百度学术]

陈冬，李玉晓，李添应.实验性过敏性鼻炎大鼠血浆细胞因子IL-4和IFN-γ 时相的变化[J].中华临床免疫和变态反应杂志，2009,3(4):254-258. [百度学术]

王冰,舒艳,梁佳.IL-6在儿童慢性鼻窦炎中的表达及其意义[J].重庆医学，2016,45(1):19-23. [百度学术]

张鲁壮,宋晓洁,崔喜才,等.IL-12,IFN-γ,EPO及铁蛋白在急性白血病患者血清中的表达及临床意义[J].现代生物医学进展，2017，17(22):4311-4313,4329. [百度学术]

尹雪,任秀敏,王建星.IL-12细胞因子家族在变应性鼻炎中的研究进展[J].临床耳鼻咽喉头颈外科杂志，2017,31(3):237-241. [百度学术]

OH SW,JY,CHA,JE,JUNG.Curcumin attenuates allergic airway inflammation and hyper-responsiveness in mice through NF-kappaB inhibition[J]. J Ethnopharmacol，2011，136（3）：414-421. [百度学术]

肖丽容,郑仕洁,侯宸,等.小鼠视网膜体外电转化及Transwell体外培养的方法[J].眼科新进展,2018,38(7):620-624. [百度学术]

ZHENG R,CHEN Y,SHI J,et al.Combinatorial IL-17RB, ST2, and TSLPR Signaling in Dendritic Cells of Patients With Allergic Rhinitis[J/OL]. Front Cell Dev Biol,（2020-4-3）[2021-11-20].DOI:10.3389/fcell.2020.00207. [百度学术]

ST L A, HANSEN A M, KARAUZUM H,et al.STAT-3-independent production of IL-17 by mouse innate-like alphabeta T cells controls ocular infection[J].J Exp Med,2018,215(4):1079-1090. [百度学术]

MENTELLA MC,SCALDAFERRI F,PIZZOFERRATO M,et al.Nutrition,IBD and Gut Microbiota:A Review［J］.Nutrients,2020,12(4):944. [百度学术]

彭慧慧,冷建杭,沈俊娅.Th17/Treg和Th1/Th2细胞失衡对变应性鼻炎发病机制的研究[J].中国卫生检验杂志,2020,3(18):2234-2237. [百度学术]

首页

期刊简介

编委会

论文查重自检

投稿须知

联系我们

消风宣窍汤对变应性鼻炎豚鼠免疫调节作用研究 PDF

摘要

目的

方法

结果

结论

关键词

1 材料与方法

1.1　实验动物

1.2　药品与试剂

1.3　仪器与设备

1.4　分组、建模及给药

1.5　观察指标

1.6　统计学方法

2 结果

2.1　豚鼠死亡情况

2.2　各组豚鼠鼻部症状行为学评分比较

2.3　各组豚鼠鼻黏膜分泌物阳性细胞计数比较

2.4　各组豚鼠血清IgE、组胺水平比较

2.5　各组豚鼠Th1、Th2、Th17细胞相关细胞因子水平比较

2.6　各组豚鼠病理组织评分比较

3 讨论

参考文献

首页

期刊简介

编委会

论文查重自检

投稿须知

联系我们

消风宣窍汤对变应性鼻炎豚鼠免疫调节作用研究 PDF

摘要

目的

方法

结果

结论

关键词

1 材料与方法

1.1 实验动物

1.2 药品与试剂

1.3 仪器与设备

1.4 分组、建模及给药

1.5 观察指标

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 豚鼠死亡情况

2.2 各组豚鼠鼻部症状行为学评分比较

2.3 各组豚鼠鼻黏膜分泌物阳性细胞计数比较

2.4 各组豚鼠血清IgE、组胺水平比较

2.5 各组豚鼠Th1、Th2、Th17细胞相关细胞因子水平比较

2.6 各组豚鼠病理组织评分比较

3 讨论

参考文献

1.1　实验动物

1.2　药品与试剂

1.3　仪器与设备

1.4　分组、建模及给药

1.5　观察指标

1.6　统计学方法

2.1　豚鼠死亡情况

2.2　各组豚鼠鼻部症状行为学评分比较

2.3　各组豚鼠鼻黏膜分泌物阳性细胞计数比较

2.4　各组豚鼠血清IgE、组胺水平比较

2.5　各组豚鼠Th1、Th2、Th17细胞相关细胞因子水平比较

2.6　各组豚鼠病理组织评分比较