摘要
选择8周龄雄性SHR 30只，适应性喂养至10周龄，按完全随机分组法分为桑芪首乌片组（SQ组）、厄贝沙坦片组（EB组）和模型组共3 组，每组10 只，连续给药28 d。同龄WKY 大鼠10只作为正常对照组，灌胃生理盐水。分别在给药前及给药后每周测量各组大鼠尾动脉血压。给药28天后取材，免疫荧光流式细胞仪计数法检测各组大鼠循环内皮细胞计数，HE 染色和透射电镜观察胸主动脉形态学改变。
给药期间，与模型组相比，SQ组SBP和DBP均显著降低（P<0.05，P<0.01）；给药28 d后，与正常组相比，模型组循环内皮细胞计数升高（P <0.01），而与模型组相比，SQ组循环内皮细胞计数计数降低（P<0.01）；HE观察胸主动脉显示，与模型组相比，SQ组大鼠血管内膜较完整，中膜肌纤维排列相对齐整，内皮损伤程度较轻；血管形态学方面，与正常对照组相比，模型组血管壁厚度（WT）、管腔内径（LD）、中膜厚度（MT）、血管横截面积（WCSA）、管腔面积（LCSA）明显增大（P<0.05或P<0.01），而与模型组相比，SQ组WT、LD、MT、WCSA、LCSA均明显减少（P<0.05或P<0.01）。
血管内皮功能障碍(Endothelial dysfunction, ED)是高血压及其靶器官损害发生、发展的重要机制，也是高血压治疗方法的潜在靶向目
雄性SPF级SHR30只，8周龄，体重235~245 g；Wistar-kyoto（WKY）大鼠10只，8周龄，体重260~280 g。均购自成都达硕实验动物有限公司，合格证号为51203500008304，实验动物生产许可证号为SYXK(川)2020-232。经适应性喂养2 w后进行实验。
桑芪首乌片（专利号：ZL 2016 1 0148818.7），由桑寄生、黄芪、制首乌、钩藤、天麻、三七等11味中药组
BP-600A全自动大小鼠无创血压测量系统（成都泰盟）；NovoCyte流式细胞仪（美国艾森生物科学公司）；DNM-9602酶标仪（北京普朗）；BA400Digital三目摄像显微镜（厦门麦克奥迪实业集团有限公司）。
将SHR适应性饲养2 w后，测定血压，收缩压高于21.4 kPa（160.71 mmHg）者为合格研究对象进入实
正式测量前先进行为期5 d的测压训练，待大鼠适应环境、血压稳定后，开始实验观察。于8:00～13:00的固定时间测量血压，将大鼠放入（37±1）℃电热恒温箱内预热15 min后，测定大鼠尾收缩期动脉压（Systolic blood pressure，SBP）及舒张期动脉压（diastolic blood pressure，DBP）。每只大鼠尾动脉收缩压经无创血压仪连续测量3 次，取平均值为该次测量的血压值。
于给药后第28 d，采用EDTA-K2抗凝管经腹主动脉采血并混匀，500 r/min离心5 min，离心弃上清，加入6~10倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，室温裂解5 min。裂解过程中宜适当摇动以促进红细胞裂解。400~500 r/min离心5 min，弃红色上清。重复裂解过程3次，细胞沉淀加入10 mL PBS重悬沉淀，500 r/min离心5 min，弃上清，重复洗涤3次，用1 mL PBS重悬。
取100 μL细胞悬液，加入10 μL PE-mouse anti-Rat CD31抗体，及10 μL FITC-anti-Rat CD45抗体，混匀后，室温避光孵育20 min，1500 r/min离心5 min，弃上清，加入2 mL PBS缓冲液洗涤; 1500 r/min离心5 min，弃上清，重复洗涤3次，加入1 mL PBS缓冲液重悬细胞沉淀，上机检测。调整FSC、SSC电压，获取 10000个细胞进行分析。以对数FSC作X轴，对数 SSC作Y轴，选取单核细胞圈门，另开一个窗，以对数FITC-CD45作X轴，PE-CD31作Y轴，以对照管调整坐标的位置，分析CD3
大鼠取血后，迅速取胸主动脉，置于4%多聚甲醛中固定，浸蜡包埋，常规切片，HE染色观察血管组织形态学变化。采用Pannoramic 250数字切片扫描仪对切片进行图像采集，每张切片先于40倍下观察全部组织，观察大体病变，选择要观察的区域采集400倍图片，观察具体病变。
大鼠取血后，迅速取胸主动脉，置于4%多聚甲醛中固定，浸蜡包埋，常规切片，切片常规脱蜡至水，天青石蓝染色液、Mayer苏木素染色液及丽春红品红染色液分别进行染色，阳性表达：胶原纤维、软骨呈蓝色，肌纤维、纤维素、肌肉、神经胶质、胞浆呈红色，红细胞呈橘红色，胞核呈黑蓝色。所得切片采用Pannoramic 250数字切片扫描仪对切片进行图像采集，每张切片先于100倍下观察全部组织，再根据组织大小及表达情况分别选取3代表性区域采集400倍图像。用Image-Pro Plus 6.0图像分析系统测定所采集全部图像的光密度（integrated optical density，IOD）和面积（Area），测量出血管壁厚度(Wall thickness, WT)、内径(Luminal diameter, LD）、中膜厚度（Mesdia thickness, MT）、血管横截面积（WalL cross-sectional area, WCSA）、管腔面积(Luminall cross-sectional area, LCSA)，以及壁厚内径比（WT/LD）、壁腔横截面积比（WCSA/LCSA），另在20倍下拍照观察血管结构。
经适应性喂养2周后，模型组、EB组及SQ组的SBP和DBP均显著高于正常对照组（P<0.01），并达到高血压状态，而模型组、SQ组及EB组各组间SBP和DBP比较，差异无统计学意义（P>0.05），说明造模成功。给药期间：与正常对照组相比，模型组不同时间段SBP均升高(P< 0.01) ，且呈逐渐上升趋势；与模型组相比，EB组和SQ组不同时间段均能有效降低SBP和DBP（P<0.05，P<0.01），但EB组与SQ组两组组间比较无统计学差异（P>0.05）。结果见
注： 与正常对照组
注： 与正常对照组
实验4 w后，与正常对照组比较，模型组、EB组循环内皮细胞计数明显升高，差异有统计学意义（P<0.01），SQ组循环内皮细胞计数升高，但差异比较无统计学意义（P>0.05）；与模型组比较，EB组、SQ组循环内皮细胞计数均有显著降低，差异有统计学意义（P<0.01）；EB组与SQ组两组循环内皮细胞计数无统计学意义差异（P>0.05）。见
注： 与正常对照组
实验4 w后，与正常对照组相比，模型组大鼠血管组织内皮损伤明显，内膜不完整，明显增厚，可见受损变性的内皮细胞脱落于管腔内，肌纤维排列不整齐，粗细不一，平滑肌细胞明显增殖，胶原纤维减少，外膜增厚；EB组大鼠血管内膜完整光滑，可见极少量受损变性的内皮细胞脱落于管腔内；SQ组大鼠血管内膜轻度损伤，内膜相对完整，可见少量内皮细胞脱落，中膜增厚，肌纤维排列紊乱，外膜较厚。结果显示，桑芪首乌片对高血压血管损伤具有一定的保护作用。见
图1 各组大鼠主动脉的病理检测情况（HE，400×）
注： A为正常对照组；B为模型组；C为EB组；D为SQ组
利用Image-Pro Plus 6.0图像分析系统测定显示：与正常对照组相比，模型组、SQ组及EB组LD、WCSA、LCSA、WT、MT明显增大（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，SQ组、EB组LD、WT/LD、WCSA、LCSA、WCSA/LCSA、WT、MT均明显减少，差异具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；对比EB组，SQ组LD、WT/LD、WCSA、LCSA、WT、MT有所增大，但差异无统计学意义（P>0.05）。结果表明，桑芪首乌片能够降低血管纤维化水平。见
注： 与正常对照组比较
注： 与正常对照组比较
图2 各组大鼠Masson染色下纤维组织（HE，400×）
注： A为正常对照组；B为模型组；C为EB组；D为SQ组
高血压是目前严重威胁人类身体健康的慢性心脑血管病，有着极高的发病率和致死率，全世界每年由高血压并发症引起的死亡人数高达940万
内皮细胞衰老或受损后从基底脱落，循环于外周血中，称循环内皮细胞（circulating endothelial cells, CECs）。正常人体内CECs的数量非常少，然而在内皮受损的病理状态下，循环内皮细胞会发生数量和形态学的变化。有人认为，CECs是目前在活体内的唯一可以直接反映血管内皮损伤的标志物，可用来评判内皮功能和稳
目前对于内皮功能紊乱及高血压发生的先后顺序尚无定
桑芪首乌片中桑寄生、制何首乌为君药，两者性微温而质润，即所谓阴中之阳药，温而不燥，具有滋补肝肾，平调阴阳之功；黄芪、三七、天麻、钩藤共为臣药，具有益气活血、平肝息风之功；白芍、当归、黄柏、浮小麦、炒麦芽共为佐药，行养血和营、清肝肾浮火、健脾行气之效，使得肝肾精血生化有源，气机升降有常。全方合用，达到补阴而潜阳亢，益阳而通脉络，以恢复人体“阴平阳秘”的状态，使得血液运行有常，血压随之得降的目的。现代药理研究显示：桑芪首乌片中多种药物，如黄芪、制何首乌、钩藤、三七等的有效活性成分都能影响血管内皮重构过程，改善血管内皮功能障碍而发挥血管保护效
综上所述，桑芪首乌片在降血压的同时，能明显降低自发性高血压大鼠CECs计数，病理组织学提示大血管内皮细胞损伤和血管平滑肌细胞异常增殖不同程度受到抑制，具有保护血管内皮功能及结构完整性的作用。但桑芪首乌片降压效果与内皮功能改善、抑制RAAS系统以及改善血管重构途径之间的关系尚有待于更深入的研究，如何明确这些靶点和阐明作用机制是今后研究的方向和思路。
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