目的 阐明金钗石斛总生物碱（DNLA）的抗抑郁作用机制。方法 基于网络药理学筛选DNLA抗抑郁潜在靶点并进行富集分析，通过分子对接技术评估主要活性成分与核心靶蛋白的相互作用。选用FH/Wjd大鼠结合慢性不可预测温和应激（CUMS）法构建抑郁动物模型，通过行为学实验和尼氏染色评估DNLA的治疗效果。最后采用转录组测序（RNA-Seq）技术检测海马组织基因表达谱变化，开展基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结果 网络药理学鉴定出PSMA4等32个关键靶点，主要涉及“神经递质受体互作”“神经退行性病变通路”及“钙离子信号转导”等信号网络；分子对接结果表明，主要生物碱类化合物与关键靶蛋白PSMA4存在良好的结合特性。动物实验显示，DNLA能有效缓解CUMS诱导的大鼠抑郁行为，并对海马神经元损伤具有保护作用。转录组测序发现DNLA可调节模型大鼠203个差异表达基因，这些基因不仅参与cAMP、Rap1等传统信号通路，还与“紧密连接”和“RNA转运”等通路显著相关。结论 DNLA的抗抑郁作用与调节神经可塑性相关信号通路、维持血脑屏障功能完整性以及影响突触局部蛋白质合成等途径有关。